材料與方法
１．１ 主要材料與藥品 手動(dòng)組織研磨玻璃勻漿器（上海酶聯(lián)生物科技有限公司），離心機(jī)（北京白洋醫(yī)療器械有限公司），家兔心肌纖維 Ｍａｓｓｏｎ染色試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司），重組人 ＲＬＸ（ＰｒｏＳｅｃＴａｎｐ－ｙＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅＬｔｄ．公司 ），烏拉坦（上海伊卡生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：２０１３０６０９），青霉素（山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)：０１５３８０），３－硝基酪氨酸（３－ＮＴ）、ＲＬＸ、ＮＯ、ｃＧＭＰ、ＰＫＧ檢測(cè)試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）。
１．２ 方法
１．２．１ 動(dòng)物分組 選取健康成年新西蘭家兔 ２８只，體質(zhì)量（２．０５±０．１９）ｋｇ，雌雄不限，購(gòu)于寧波大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心［許可證號(hào)：ＳＣＸＫ（浙）２０１２０００５］。隨機(jī)分為假手術(shù)組６只，ＤＨＦ組６只、ＲＬＸ小劑量組８只，ＲＬＸ大劑量組８只。
１．２．２ 建立 ＤＨＦ模型及給藥 參見(jiàn)文獻(xiàn)［５］建立
ＤＨＦ模型。手術(shù)嚴(yán)格無(wú)菌操作，每只家兔術(shù)后給予３０萬(wàn) Ｕ／（ｋｇ·ｄ）青霉素肌肉注射３ｄ，預(yù)防感染，術(shù)后精心飼養(yǎng)。術(shù)后第８周開(kāi)始，使用微升注射器，經(jīng)家兔耳緣靜脈注射 ＲＬＸ，ＲＬＸ 小劑量組為３０μｇ／（ｋｇ·ｄ），ＲＯＸ大劑量組為 ９８μｇ／（ｋｇ·ｄ），給藥時(shí)間２周。劑量標(biāo)準(zhǔn)參見(jiàn)文獻(xiàn)［６］，三期臨床試驗(yàn)表明，急性心力衰竭患者 ＲＬＸ最佳劑量為３０ ／（ｋ · μｇ ｇ
ｄ），再根據(jù)徐淑云教授主編的 《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》換算出家兔等效給藥劑量為 ９８μｇ／（ｋｇ·ｄ）。ＤＨＦ組和假手術(shù)組不做任何處理，標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)以做空白對(duì)照。
１．２．３ 血清鈉尿肽和 ＲＬＸ測(cè)定及心肌勻漿指標(biāo)測(cè)定 術(shù)后１０周給藥結(jié)束，對(duì)各組家兔經(jīng)耳緣靜脈抽血、離心后取上清液－２０ 備檢，采用ＥＬＩＳＡ 法檢測(cè)各組家兔鈉尿肽、ＲＬＸ；采用空氣栓塞法處死各組加兔，迅速開(kāi)胸取出心臟，快速置于裝有預(yù)冷的生理鹽水杯內(nèi)充分洗凈血液，濾紙吸干稱重，去除心包、心房、右心室及脂肪組織等，切取部分左心室后壁稱重，其余部分留作病理染色切片，按１ ９的體
質(zhì)量體積比加入預(yù)冷的ＰＢＳ緩沖液（Ｈ７．４），在冰浴中充分研磨制成１０％勻漿液，３０００ｒ／ｍｉｎ離心２０ｍｉｎ，取０．４ｍｌ上清液 －２０ 備檢。待標(biāo)本收集完畢后，采用 ＥＬＩＳＡ 法檢測(cè)各組家兔１０％心肌勻漿上清液３－ＮＴ，ＮＯ、ｃＧＭＰ、ＰＫＧ 活性。檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)。
１．３ 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用ＳＰＳＳ１８．０統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料用 表示，采用單因素方差分析，
ｘ±ｓ Ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
２ 結(jié) 果
２．１ 假手術(shù)組與 ＤＨＦ組血清 ＲＬＸ水平比較 與假手術(shù)組比較，ＤＨＦ組血清ＲＬＸ水平明顯升高，差
異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［（４６６．３２±６．５２）／ｍｌｖｓ（２２２．４±ｐｇ
５．２９）ｐｇ／ｍｌ，Ｐ＜０．０５］。
２．２ ４組血清鈉尿肽水平比較 與假手術(shù)組比較，ＤＨＦ組、ＲＬＸ小劑量組、ＲＬＸ大劑量組血清鈉尿肽水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。與ＤＨＦ組比較，ＲＬＸ 大劑量組血清鈉尿肽水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），ＲＬＸ小劑量組血清鈉尿肽水平有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５，表１）。
２．３ ４組心肌勻漿指標(biāo)比較 與假手術(shù)組比較，
ＤＨＦ組、ＲＬＸ小劑量組、ＲＬＸ大劑量組心肌勻漿３－ＮＴ水平明顯升高，ＮＯ、ｃＧＭＰ、ＰＫＧ活性明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。與 ＤＨＦ 組比較，ＲＬＸ大劑量組心肌勻漿中 ＮＯ、ｃＧＭＰ、ＰＫＧ 活性明顯升高，３－ＮＴ水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），ＲＬＸ 小劑量組 ＮＯ、ｃＧＭＰ、ＰＫＧ 活性輕微升高，３－ＮＴ有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５，表１）。
本實(shí)驗(yàn)尚存在不足之處：（１）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量偏少，可能導(dǎo)致一些數(shù)據(jù)波動(dòng)、誤差可能。
（２）選取的家兔雌雄不限，雌雄家兔的基礎(chǔ) ＲＬＸ 水平不同，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
（3）? 在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，我們將對(duì)此補(bǔ)充改進(jìn)，以獲得更有意義的結(jié)論。
