1、蛋白特異性:
針對需求檢測的蛋白查找抗體,幾個細(xì)節(jié)要區(qū)別,重組表達的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測,對抗體的要求是不一樣的,注意檢查抗體說明書的檢測說明。假如重組蛋白不 是全長表達,則需求注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與潤飾的辦法,特別表型的蛋白需求進行序列比對,并結(jié)合抗體免 疫原序列,檢查穿插反響的狀況。磷酸化蛋白檢測需求確定詳細(xì)位點,不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機制存在,不宜一概而論。
2、種屬特異性:
同種蛋白不同物種,有著或大或小的差異。現(xiàn)在大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計多肽抗原的,依據(jù)蛋白的同源狀況與其他種屬發(fā)生穿插 反響。需求參照說明書注明的可反響種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體,能夠通過蛋白的序列比對,挑選同源序列免疫的抗體,不過一般這種狀況生產(chǎn)商不會受 理其關(guān)于質(zhì)量的申訴,假如能夠申請到免費的抗體樣品,則利于抗體挑選。
3、試驗辦法特異性:
現(xiàn)在使用抗體的試驗辦法有許多,不同的使用辦法過程中,因為對蛋白樣品的處理辦法不一樣,蛋白的含量有差異,對抗體的識別表位和效價要求都是不一樣的。詳細(xì) 的依據(jù)說明書注明的產(chǎn)品應(yīng)用辦法進行挑選。可是生產(chǎn)商一般不會將每個抗體都進行各種試驗的檢測,現(xiàn)在檢測比較多的僅僅WB、IHC、IF等,假如針對詳細(xì) 的試驗辦法沒有找到適宜的抗體的,能夠結(jié)合蛋白序列分析和抗體的抗原信息,挑選盡可能有作用的抗體。同樣,申請到免費的抗體樣品是個很好的途徑。
4、符號物的特異性:
一般基于試驗操作的試驗辦法不會使用帶有符號的一抗,比方WB、IHC等,都是通過二抗類的試劑符號到達結(jié)果呈現(xiàn)的目的。
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