培養基的制備過程中，有多個細節要留意。關于培養基的正確制備。
這幾點很重：
1、培養基配方的選定同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些不同。因此，除所用的是標準方法，應嚴格按其規定進行制造外，一般均應盡量搜集有關材料，加以比較核對，再根據自己的運用目的，加以選用，記載其來歷。
2、培養基的制備記載
每次制備培養基均應有記載，包含培養基稱號，配方及其來歷，和各種成份的商標，畢竟pH值、消毒的溫度和時刻制備的日期和制備者等，記載應拷貝一份，原記載保存備檢，拷貝記載隨制好的培養基一同寄存、以防發生紊亂。
3、培養基成分的稱取
培養基的各種成分有必要精確稱取并要留意避免紊亂，最好一次完成，不要中止。可將配方置于傍側，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側，每種稱取結束后，即移放于右側。徹底稱取結束后，還應進行一次檢查。
4、培養基各成份的混合和溶化
培養基所用化學藥品均應是化學純的。運用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養基中，使細菌不易生長。最好運用不銹鋼鍋加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或活動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。
在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動、以防焦化、如發現有焦化現象、該培養基即不能運用，應從頭制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使一切成分徹底溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充沛混合。在加熱溶化過程中，因蒸騰而丟失的水分，畢竟有必要加以補足。
5、培養基pH的開端調正
因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所改變，培養基各成分徹底溶解后，應進行pH的開端調正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會有顯著的升高。因此，對這個過程，操作者應隨時留意探索經歷、以期能掌握培養基的畢竟pH，確保培養基的質量。pH調整后，還應將培養基煮沸數分鐘，以利培養基堆積物的分出。
6、培養基的過濾澄清
液體培養基有必要肯定澄清，瓊脂培養基也應通明無顯著堆積，因此，需求采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法，濾紙應折疊成折扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙分裂。
瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中心夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和馬鈴薯等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙重復過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。行將冷卻至55~60°C的培養基放入大的三角燒瓶內，裝入量不得逾越燒瓶容量的1/2，每1000ml培養基參加1~2個雞蛋的蛋白，強力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。
7、培養基的分裝
培養基的分裝，應按運用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等恰當容器內。分裝量不得超容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎（現試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時最好能運用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養基時，分裝量應以能構成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗潔凈并經干烤消毒，以利于培養基的徹底滅菌。每批培養基應其他分裝20ml培養基于一小玻璃瓶中，隨該批培養基一同滅菌，以為測定該批培養基畢竟pH之用。
8、培養基的滅菌
一般培養基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養基制備方法中，如無特別規定，即可用此法滅菌。
某些畏熱成分，如糖類，應另行配成20%或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，往后再用無菌操作技能、定量加于培養基。明膠培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應以無菌操作技能抽取和參加于經冷卻約50°C左右的培養基中。
瓊脂斜面培養基應在滅菌后當即取出，冷至55℃-60℃時，擺置成恰當斜面，待其自然凝結。
9、培養基的質量測驗
每批培養基制備好往后，應細心檢查一遍，如發現分裂、水分浸入、色澤失常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去。并測定其畢竟pH。
將悉數培養基放入36±1°C恒溫箱培養過夜，如發現有菌生長，即棄去。
用有關的標準菌株接種1~2管或瓶培養基，培養24~48小時，如無菌生長或生長欠好。應清查原因并重復接種一次，如成果仍同前，則該批培養基即應棄去，不能運用。
10、培養基的保存
培養基應寄存于冷暗處，最好能放于一般冰箱內。放置時刻不宜逾越一周，傾瀉的平板培養基不宜逾越3天。每批培養基均有必要附有該批培養基制備記載副頁或顯著標簽。
