方法：

1. 提取液制備：每500ul冷的蛋白提取液中參加2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2.取5-10×106個細胞①，在4℃，1000rpm條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，搜集細胞。

3. 用冷PBS洗刷細胞兩次，每次洗刷后盡可能吸干上清。

4. 每5×106個細胞中參加500ul冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。

5. 在4℃，14000rpm條件下離心15分鐘。

6.? 快速將上清吸入另一預冷的潔凈離心管，即可得到磷酸化蛋白。

7. 將上述蛋白提取物定量②后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下流實驗③。

方法：

1. 提取液制備：每500ul冷的蛋白提取液中參加2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取100mg安排樣本剪碎，參加總蛋白提取液，用安排勻漿器勻漿至無顯著肉眼可見固體①。

3.? 將安排勻漿吸入一預冷的潔凈離心管中，在4℃，10000rpm條件下離心5分鐘。

4. 將上清吸入另一預冷的潔凈離心管，即可得到磷酸化蛋白。

5. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下流實驗。