在微生物查驗中，正確制備培養(yǎng)基是基礎(chǔ)進(jìn)程之一。試驗室運用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時，應(yīng)按照配方精確制作，并記載相關(guān)信息。日前，上海酶聯(lián)生物技術(shù)員分分出zui新培養(yǎng)基制備流程，在這里共享給我們：
一、水
試驗用水的電導(dǎo)率在25℃時不應(yīng)逾越25μS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4ΜΩcm)，除非還有規(guī)則要求。
水的微生物污染不應(yīng)逾越103 CFU/mL。應(yīng)按GB 4789.2，選用平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，在36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h進(jìn)行定時查看微生物污染。
二、稱重和溶解
留神稱量所需量的脫水組成培養(yǎng)基(必要時佩帶口罩或在通風(fēng)柜中操作，以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末)，先參加適量的水，充沛混合(留意避免培養(yǎng)基結(jié)塊)，然后加水至所需的量后恰當(dāng)加熱，并重復(fù)或連續(xù)拌和使其快速松散，必要時應(yīng)徹底溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應(yīng)浸泡幾分鐘。
三、pH的測定和調(diào)整
用pH計測pH，必要時在滅菌前進(jìn)行調(diào)整，除特別闡明外，培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25℃時，pH應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)pH±0.2范圍內(nèi)。一般運用濃度約為40g/L(約1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L(約1mol/L)的鹽酸溶液調(diào)整培養(yǎng)基的pH。如需滅菌后進(jìn)行調(diào)整，則運用滅菌或除菌的溶液。
四、分裝
將配好的培養(yǎng)基分裝到恰當(dāng)?shù)娜萜髦校萜鞯捏w積應(yīng)比培養(yǎng)基體積zui少大20%。
五、滅菌
1.一般要求
培養(yǎng)基應(yīng)選用濕熱滅菌法或過濾除菌法。
某些培養(yǎng)基不能或不需要高壓滅菌，可選用煮沸滅菌，如SC肉湯等特定的培養(yǎng)基中含有對光和熱活絡(luò)的物質(zhì)，煮沸后應(yīng)敏捷冷卻，避光保存；有些試劑則不需滅菌，可直接運用。
2.濕熱滅菌
濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進(jìn)行，高壓滅菌一般選用121℃±3℃滅菌15min，具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)查驗標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)則進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基體積不應(yīng)逾越1000 mL，不然滅菌時可能會構(gòu)成過度加熱。一切的操作應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)或運用闡明的規(guī)則進(jìn)行。
滅菌效果的操控是關(guān)鍵問題。加熱后選用恰當(dāng)?shù)姆椒ɡ鋮s，以防加熱過度。這關(guān)于大容量和活絡(luò)培養(yǎng)基十分重要，例如含有煌綠的培養(yǎng)基。
3.過濾除菌
過濾除菌可在真空或加壓的條件下進(jìn)行。運用孔徑為0.2μm的無菌設(shè)備和濾膜。消毒過濾設(shè)備的。
各個部分或運用預(yù)先消毒的設(shè)備。一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)，為了抵達(dá)有用過濾，應(yīng)事先將濾膜用無菌水潮濕。
4.查看
應(yīng)對經(jīng)濕熱滅菌或過濾除菌的培養(yǎng)基進(jìn)行查看，特別要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等方針進(jìn)行查看。
六、增加成分的制備
制備含有有毒物質(zhì)的增加成分(特別是抗生素)時應(yīng)留神操作(必要時在通風(fēng)柜中操作)，避免因粉塵的分散構(gòu)成試驗人員過敏或發(fā)作其他不良反應(yīng)；制備溶液時應(yīng)按產(chǎn)品運用闡明操作。
不要運用過期的增加劑；抗生素工作溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配；批量制作的抗生素溶液可分裝后冷凍貯存，但凍住后的貯存溶液不能再次冷凍；廠商應(yīng)供給冷凍對抗生素活性影響的有關(guān)資料，也可由運用者自行測定。
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