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怎么找到ELISA配對抗體

由于沒有標準品我們做出來的抗體沒有方法用標準品來驗證是否與其發作反響,單克隆抗體制備時許多朋友會遇到這樣的問題,即我們免疫用的蛋白為原核表達蛋白而目的蛋白是真核蛋白或b毒等,zui終導致我們做出的是無用抗體。以下內容為我公司實驗室技能總結的幾種方法供咱們參看,希望對咱們有所幫助。

一、若要檢測抗原為某一細胞因子

方法:
1、通過超表達的方法建立安穩表達的細胞系,留意要在目的蛋白上加相應的標簽,以便純化。若僅僅是找到配對抗體則不需求純化甚至不需求建立安穩表達的細胞系瞬時轉染就可完結,若要進一步作出標準曲線請純化。
2、 將細胞系建立后,咱們就可以拿到標準品了,做配對作業就相應簡略。
3、若該種細胞因子可有某種陽性影響物很多影響而來,也可不做細胞系。用陽性影響物影響,咱們細胞影響物的上清液來做標準品也可。

二、若要檢測的抗原為某種新的b毒


方法:
1、很多做出該b毒某個蛋白的單克隆抗體;
2、很多搜集該b毒疑似感染動物或人血液,用PCR的方法進一步承認每份血液是否真的有該b毒存在;
3、將你做出的很多抗體中的一個做符號作為符號抗體,其他全部抗體作為包被抗體,檢測第二步中承認陽性的血清,結果與陰性血清做比照,并畫出點狀分布圖。若陽性血清大部分的點在陰性血清之上恭喜你找到配對抗體了;若結果相差不大,請重新符號一株抗體做相同實驗。