材料與方法
1.1 主要材料與藥品 手動組織研磨玻璃勻漿器(上海酶聯生物科技有限公司),離心機(北京白洋醫療器械有限公司),家兔心肌纖維 Masson染色試劑盒(上海酶聯生物科技有限公司),重組人 RLX(ProSecTanp-yTechnoGeneLtd.公司 ),烏拉坦(上海伊卡生物技術有限公司,批號:20130609),青霉素(山東魯抗醫藥股份有限公司,批號:015380),3-硝基酪氨酸(3-NT)、RLX、NO、cGMP、PKG檢測試劑盒(上海酶聯生物科技有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 動物分組 選取健康成年新西蘭家兔 28只,體質量(2.05±0.19)kg,雌雄不限,購于寧波大學動物實驗中心[許可證號:SCXK(浙)20120005]。隨機分為假手術組6只,DHF組6只、RLX小劑量組8只,RLX大劑量組8只。
1.2.2 建立 DHF模型及給藥 參見文獻[5]建立
DHF模型。手術嚴格無菌操作,每只家兔術后給予30萬 U/(kg·d)青霉素肌肉注射3d,預防感染,術后精心飼養。術后第8周開始,使用微升注射器,經家兔耳緣靜脈注射 RLX,RLX 小劑量組為30μg/(kg·d),ROX大劑量組為 98μg/(kg·d),給藥時間2周。劑量標準參見文獻[6],三期臨床試驗表明,急性心力衰竭患者 RLX最佳劑量為30 /(k · μg gd),再根據徐淑云教授主編的 《藥理實驗方法學》換算出家兔等效給藥劑量為 98μg/(kg·d)。DHF組和假手術組不做任何處理,標準飼料飼養以做空白對照。
1.2.3 血清鈉尿肽和 RLX測定及心肌勻漿指標測定 術后10周給藥結束,對各組家兔經耳緣靜脈抽血、離心后取上清液-20 備檢,采用ELISA 法檢測各組家兔鈉尿肽、RLX;采用空氣栓塞法處死各組加兔,迅速開胸取出心臟,快速置于裝有預冷的生理鹽水杯內充分洗凈血液,濾紙吸干稱重,去除心包、心房、右心室及脂肪組織等,切取部分左心室后壁稱重,其余部分留作病理染色切片,按1 9的體質量體積比加入預冷的PBS緩沖液(H7.4),在冰浴中充分研磨制成10%勻漿液,3000r/min離心20min,取0.4ml上清液 -20 備檢。待標本收集完畢后,采用 ELISA 法檢測各組家兔10%心肌勻漿上清液3-NT,NO、cGMP、PKG 活性。檢測方法嚴格按照試劑說明書。
1.3 統計學方法 采用SPSS18.0統計軟件,計量資料用 表示,采用單因素方差分析,
x±s P<0.05
為差異有統計學意義。
2 結 果
2.1 假手術組與 DHF組血清 RLX水平比較 與假手術組比較,DHF組血清RLX水平明顯升高,差
異有統計學意義[(466.32±6.52)/mlvs(222.4±pg
5.29)pg/ml,P<0.05]。
2.2 4組血清鈉尿肽水平比較 與假手術組比較,DHF組、RLX小劑量組、RLX大劑量組血清鈉尿肽水平明顯升高,差異有統計學意義(P<0.05)。與DHF組比較,RLX 大劑量組血清鈉尿肽水平明顯降低,差異有統計學意義(P<0.05),RLX小劑量組血清鈉尿肽水平有下降趨勢,但差異無統計學意義(P>0.05,表1)。
2.3 4組心肌勻漿指標比較 與假手術組比較,
DHF組、RLX小劑量組、RLX大劑量組心肌勻漿3-NT水平明顯升高,NO、cGMP、PKG活性明顯降低,差異有統計學意義(P<0.05)。與 DHF 組比較,RLX大劑量組心肌勻漿中 NO、cGMP、PKG 活性明顯升高,3-NT水平明顯降低,差異有統計學意義(P<0.05),RLX 小劑量組 NO、cGMP、PKG 活性輕微升高,3-NT有下降趨勢,但差異無統計學意義(P>0.05,表1)。
本實驗尚存在不足之處:(1)實驗動物數量偏少,可能導致一些數據波動、誤差可能。
(2)選取的家兔雌雄不限,雌雄家兔的基礎 RLX 水平不同,可能會影響實驗的結果。
(3)? 在后續實驗中,我們將對此補充改進,以獲得更有意義的結論。