就一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言無論運(yùn)作的多么好，總會(huì)因?yàn)楦镄录夹g(shù)或拓展方向二影響原來的流程，從而產(chǎn)生各種各樣的問題。有些地方錯(cuò)誤的操作有可能帶來嚴(yán)重的后果，那么今天主要列舉造成細(xì)胞生長緩慢的兩大原因。

一、培養(yǎng)體系出現(xiàn)問題

1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。

（1）如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素，細(xì)胞污染則是不可避免的。

? ①? 用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查。

? ②? 如果細(xì)胞被污染則要棄掉。

（2）由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測。

（3）檢測可能污染的途徑和原因。

2.檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清（例如：是否批次不同或廠商不同）。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10×儲(chǔ)存液，而現(xiàn)在購買的培養(yǎng)基更換為1×液體，而隨后證明問題就出自于此。

3.如果問題與培養(yǎng)基無關(guān)，那么很可能還是細(xì)胞的問題。

（1）復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞，并且與正在培養(yǎng)的細(xì)胞加以比較。兩種細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)分開，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按（2）～（4）步的方法做排查:

（2）對(duì)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并繪制生長曲線，與以前培養(yǎng)該細(xì)胞的資料進(jìn)行比較，檢查是否有下列改變:

? ①? 傳代時(shí)是否接種密度過低。

? ②??細(xì)胞傳代是否過于頻繁。

? ③? 傳代前細(xì)胞平臺(tái)期是否過長。

（3）是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號(hào)，檢查批號(hào)和供貨商。

（4）是否細(xì)胞分離過程中嚴(yán)重?fù)p傷了細(xì)胞，應(yīng)檢測:

? ①? 胰蛋白酶（其他消化試劑）消化時(shí)間是否過長。

? ②? 消化液的濃度和活性是否過高、過強(qiáng)。

? ③? 胰蛋白酶消化時(shí)，孵箱溫度是否過高。

? ④? 吹打消化細(xì)胞時(shí)是否過于用力。

? ⑤? 細(xì)胞是否對(duì) EDTA過于敏感（如果添加了EDTA）。

? ⑥? 胰蛋白酶稀釋是否有誤。

? ⑦? 是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。

二、檢查共用的設(shè)備和試劑

溫室和孵箱溫度

（1）溫度和溫度設(shè)定不準(zhǔn)。

? ①?自動(dòng)調(diào)溫器損壞。

? ②?開關(guān)孵箱門過于頻繁。

? ③?孵箱門未關(guān)緊。

? ④?風(fēng)扇損壞造成散熱不均。

（2）孵箱濕度不能維持

? ①?水盤中未加水。

? ②?孵箱有滲漏。

? ③?開關(guān)孵箱門過于頻繁。

? ④?在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBSA，每日稱重，以檢查蒸發(fā)率。

（3）孵箱的CO2濃度不準(zhǔn)

? ①?開關(guān)孵箱門過于頻繁。

? ②?CO2控制器出現(xiàn)問題。

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