我司講述ELISA試劑盒技術流程

雙抗體夾心法(檢測末知抗原)
1.用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml. 在反應孔中加0.1ml , 4°C過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次。

2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中, 置37°C孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37%C 孵育0.5~ 1小時,洗滌。

4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml , 37°C 10~ 30分鐘。

5.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-” 號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔0D值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

間接法(檢測未知抗體)
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml ，每孔加0.1ml , 4°C過夜。次日洗滌3次。

2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37°C孵育1小時，洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

3、加酶標抗體:于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標*抗體(抗抗體)0.05ml , 37C孵育30-60分鐘,洗滌*后- -遍用DDW洗滌。

4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml , 37%C 10~ 30分鐘。

5.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6.結果判定:可于白色背景上。直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、 “-” 號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O值,若大于規定的陰性對照0D值的2.1倍,即為陽性。

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