細胞生物學研究中，為了讓細胞能實現長期研究細胞生物學功能的效果，實驗人員往往需要通過一些處理方式將良好狀態的細胞保存起來，以備后期可以使用。
一、 程序凍存步驟（需梯度降溫）
1、 配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎培養基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO。
2、 制備好的細胞懸液計數，計算總細胞量。
3、 細胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉速1200rpm（250g）3min。
4、 加入配置好的凍存液重懸，調整細胞濃度為3×106~1×107cells/mL。
5、 分裝入凍存管，一個凍存管分裝1~1.5毫升。
6、 推薦使用程序降溫盒，分裝好的凍存管轉入程序降溫盒后直接放入-80℃冰箱過夜。
7、 如沒有程序降溫盒，則按下列順序依次降溫：室溫→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃過夜→液氮保存，注意轉移過程中要保冷，避免產生溫差或凍存管融化。
8、 從-80℃冰箱取出凍存管迅速轉移到液氮長期保存。
二、液氮冷凍保存法
細胞凍存常用的技術是液氮冷凍保存法，主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細胞。
注意：細胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍，細胞內外的水分會很快形成冰晶，從而引起一系列不良反應。如細胞脫水使局部電解質濃度增高，pH值改變，部分蛋白質由于上述原因而變性，引起細胞內部空間結構紊亂，溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶，使細胞內結構成分造成破壞，線粒體腫脹，功能丟失，并造成能量代謝障礙。胞膜上的類脂蛋白復合體也易破壞引起細胞膜通透性的改變，使細胞內容物丟失。如果細胞內冰晶形成較多，隨冷凍溫度的降低，冰晶體積膨脹造成細胞核DNA空間構型發生不可逆的損傷，而致細胞死亡。
細胞培養方法,細胞培養管理,細胞培養技術,細胞培養原理,原代細胞,細胞永生化,生物科技,生物技術支持,細胞凍存,無血清細胞凍存液因此，細胞冷凍技術的關鍵是盡可能地減少細胞內水分，減少細胞內冰晶的形成。通常采用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作保護劑（滲透型），這兩種物質分子量小，溶解度大，易穿透細胞，可以使冰點下降，提高細胞膜對水的通透性，且對細胞無明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細胞內的水分滲出細胞外，減少胞內形成冰結晶的機會，從而減少冰晶對細胞的損傷。對于一些原代細胞（皮膚細胞），除滲透型保護劑外，還會適當添加表面型保護劑（海藻糖），以提高細胞存活率。
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