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ELISA試劑盒免疫酶技術(shù)

ELISA試劑盒固相載體采用免疫酶技術(shù)
免疫酶技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。可作固相載體的物質(zhì)很多,常用的是聚苯乙x烯。聚苯乙x具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙x為塑料,可制成各種形式,在測定過程中,它作為載體和容器,不參與化學(xué)反應(yīng),加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。
聚苯x載體的形狀主要有三種:小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特點(diǎn)是還能兼作反應(yīng)的容器,然后放入分光光度計(jì)中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器,在洗滌過程中使圓珠滾動(dòng)淋洗,效果更好。常用的載體為微量反應(yīng)板,于ELISA測定的產(chǎn)品也稱為ELISA板,通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8x12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測,有制成8聯(lián)或I2聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測,并可在特定的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙xELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號(hào)的聚苯乙x制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人

IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔后,每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后分別測每孔溶液的吸光度。控制反應(yīng)條件,使各讀數(shù)在0.8左右。計(jì)算所有讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10%.與聚苯乙x類似的塑料為聚氯乙x。作為ELISA固相載體,聚氯乙x板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,可切割,價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙x板。聚氯乙x對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙x高,但空白值有時(shí)也略。

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