風帆，不掛在桅桿上，是一塊無用的布;桅桿,不掛上風帆，是一根平常的柱;理想，付諸行動是虛無縹緲的霧;行動，而沒有理想,是徒走沒有盡頭的路。酶聯生物給您解答懸浮細胞培養的正確方法。
一、材料與儀器
1.凍存HeLa S3 細胞
70%乙醇MEM-10胰酶/ EDTA
旋轉瓶培養基-5 25 cm2 組織培養瓶C02培養箱Sorval1 H-6000A 轉子100 m1或200 m1通氣旋轉瓶和帶濾膜的瓶蓋
二、步驟
1.將含有凍存HeLa S3細胞的安瓿放入37C水浴中解凍。
2.用70%乙醇對安瓿的頂端進行消毒， 打開安瓿，用吸管將細胞轉移到含有5m1 MEM-10培養基的25 cm2組織培養瓶中，輕輕搖動培養瓶，使細胞均勻分布于培養瓶中，放入5% C02加濕培養箱中37C培養過夜。
3.將培養基吸出，用0.5 m1 37C的胰酶/EDTA覆蓋細胞，消化30~40 s。
4.加入10m1旋轉瓶培養基-5，并將細胞轉移至50ml的離心管中。室溫1800g離心5min，棄上清。
5.將細胞沉淀懸浮在5 ml的旋轉瓶培養基-5中，上下吹打，將細胞團打散。
6.在100m1或200m通氣旋轉瓶中加入50 ml旋轉瓶培養基-5，并將細胞懸液轉移到瓶中。
7.取出1 ml細胞懸液，用血細胞計數器(附錄3F)進行細胞計數。加入適量的旋轉瓶培養基-5， 使細胞密度為(3~4) X 105細胞/m1。將細胞放入無C02培養箱，37C旋轉培養。
8.隨后的兩天讓細胞繼續生長， 并且每天對細胞進行計數， 加入適量的旋轉瓶培養基-5 以維持(3~4) X105細胞/m1的細胞密度。
9.取1 m1的細胞懸液，用血細胞計數器對細胞進行監測。
10.當細胞密度達到(4~5) X105細胞/m1時，隔天或每天用培養基將細胞稀釋至1.5X105 或2.5>105細胞/m1。
11.分別將裝有50 m1或100 m1細胞懸液的100 ml或200 m1通氣旋轉瓶放入37C無C02培養箱旋轉培養。每天或隔天傳代。
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