谷氨酰胺合成酶(GS)測試盒
一、測定原理
GS 在 ATP 和 Mg2+的存在下,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺進一步轉化為γ-谷氨酰基異羥肟酸,在酸性條件下形成的絡合物在 540nm 處有最大吸收峰,可用分光光度計測定其吸光值來判定 GS 的活力。
二、樣本前處理
1、組織:按照組織重量(g):提取液體積(ml)為 1:10 的比例混合后,冰水浴勻漿,4000
轉/min 離心 10min,取上清置冰上待測。
2、血清(漿):直接取樣測定。
3、胞、細菌或組織樣品:收集細胞或細菌于離心管中,離心后棄上清,按照細胞或 細菌數(shù)量(104 個):提取液體積(ml)為 500:1 的比例混合,超聲波破碎細胞或細菌(條件:冰浴、功率 20%或 200W、超聲 3s、間隔 10s、重復 30 次)后待測。