關于血清滅活的問題由來已久。熱滅活目的是祛除血清中補體等對熱敏感的物質。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。很多同學找到我們,詢問血清到底要不要滅活、如何滅活的問題。
一、血清滅活指的是什么
一般情況下,血清的滅活就是將解凍后的血清,通過水浴加熱的方式來處理,達到滅活補體的目的,溫度和時間控制在如下范圍:
56℃加熱30分鐘或40℃加熱20分鐘
因此,買到手的血清究竟要不要滅活,主要考慮血清中的補體對于細胞培養以及后續實驗是否產生影響。所以就來簡單講講,補體與細胞培養的關系。
二、補體對細胞培養的影響
補體是一種血清蛋白質,存在于人和脊椎動物血清及組織液中,不耐熱,可組成龐大的補體系統,可介導免疫應答和炎癥反應。激活的補體參與溶解細胞過程,刺激平滑肌收縮、細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。
因此,如果你的實驗涉及以下這些情況時,建議去除血清可能帶來的補體系統的干擾。
1免疫學研究
2誘導胚胎干細胞分化
3利用昆蟲細胞研究病毒感染
4培養平滑肌細胞
5其他補體參與的細胞培養過程
血清的最佳工作溫度一般是在37℃左右,所以熱滅火對于血清而言,也是一種不小的傷害,會導致一些營養成分流失,進而影響細胞狀態。
那么,市面上的血清都含有補體嗎?都需要進行熱滅活嗎?隨著研究的深入,網上也有一些人表示,胎牛血清無需熱滅活,這究竟是真是假?接下來就給大家揭示其中奧秘。
三、血清滅活疑云
首先我們要明晰一點,按照牛發育情況,大體上,血清可以分為胎牛血清、新生牛血清、小牛血清和成牛血清。
其中,正規的胎牛血清,要求對5-8月胎齡(一般牛在10個月左右足月,后自然分娩)的胎牛采用心臟穿刺的方法采血,隨后進行其他制備步驟,得到胎牛血清。因此:
靠譜的胎牛血清
沒有形成一個完整的補體系統,不會真正地干預免疫!
所以,網傳的正規胎牛血清無需熱滅活的說法,是正確的,正常使用即可。
四、特殊情況
但有一點需要注意,如果你的實驗涉及到一些其他特殊的神秘活性物質,必須要滅活,根據血清廠家多年來總結的經驗,常規解凍后,40℃水浴加熱20分鐘即可,能夠最大程度地保留營養成分。
以上是講述血清到底需不需要滅活